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人基質金屬蛋白酶14（MMP-14）elisa試劑盒檢測方法和原理！

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人基質金屬蛋白酶14（MMP-14）水平。用純化

的人基質金屬蛋白酶14（MMP-14）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中

依次加入基質金屬蛋白酶14（MMP-14），再與HRP 標記的基質金屬蛋白酶14（MMP-14）

抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹-底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在

HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的

基質金屬蛋白酶14（MMP-14）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），

通過標準曲線計算樣品中人基質金屬蛋白酶14（MMP-14）活性濃度。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

800U/L 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

400U/L 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

200U/L 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

100U/L 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

50U/L 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、

待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，

然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡

量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此

重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色

10 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止

液后15 分鐘以內進行。

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