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組織總磷含量檢測試劑盒案例操作

產品說明： 磷的存在形態包括無機磷與有機磷。無機磷主要指根，參與生物體內多種代謝，包括能量代謝、核酸代 謝、蛋白質化和脫化等。通過測定總磷與無機磷含量即可了解作物對磷的利用率，進而為合理施肥提供 依據。總磷經消化后，轉化成無機磷。鉬藍法是測定無機磷含量的經典方法，一定條件下，鉬藍與根生成660nm 有特征吸收峰的物質，通過測定660nm光吸收，即可計算無機磷含量，進而可計算出組織中總磷含量。

技術指標：
咀低檢出限：0.0585 mmol/L
線性范圍：0.0625-2 mmol/L
注意：實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品： 可見分光光度計、離心機、水浴鍋、可調式移液槍、1mL 玻璃比色皿、蒸餾水和濃硫酸。 

操作步驟： 

一、有機磷消化（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻） 稱取約 0.1 g 組織于帶蓋試管中，加濃硫酸 1.0 mL，蓋緊（封口膜封口，防止水分散失）后沸水浴 10min 左 右，待溶液呈黑色或棕色時取出。稍冷后，加試劑一 200μL，充分混勻，蓋緊后繼續沸水浴，直到溶液呈透明狀， 取出室溫冷卻后，加蒸餾水 3.8 mL，充分混勻；室溫，10000rpm，離心 10min，取上清液，待測。

注意事項： 

1、試劑三需臨用前配制，限當天使用。 

2、測定前先用 1~2 個樣本做預實驗，如吸光值大于 0.8 時，需用蒸餾水做相應稀釋。

實驗實例： 1、 取 0.1g 腎臟按照提取步驟操作，離心取上清之后按照測定步驟操作，測得計算 A 測定=0.273，A 空白=0.016， A 標準=0.429，按樣本質量計算總磷含量得： 總磷含量(mmol/g 質量)= 0.005×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 質量。 2、 取 0.1g 脾按照提取步驟操作，離心取上清之后按照測定步驟操作，測得計算 A 測定=0.268，A 空白=0.016，A 標準=0.429，按樣本質量計算總磷含量得： 總磷含量(mmol/g 質量)= 0.005×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標準管-A 空白管)÷W= 0.031 mmol/g 質量。