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信帆生物教你如何在實(shí)驗(yàn)室里用小技巧提高工作效率!
更新時(shí)間:2017-03-10   點(diǎn)擊次數(shù):1153次

信帆生物教你如何在實(shí)驗(yàn)室里用小技巧提高工作效率!

1 跑 page 膠的時(shí)候,小電壓跑會(huì)避免高電壓產(chǎn)生的熱量爾導(dǎo)致的膠層變形。低電壓泳道會(huì) 比大電壓泳道跑的直一些,且分離效果更高,有利于分子量相差不大的蛋白分離。

2. 提取質(zhì)粒的時(shí)候,zui后一步的酒精揮發(fā)很關(guān)鍵,基本上是其后續(xù)的酶切反應(yīng)的決定性因 素。 所以這一步盡量揮發(fā)長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間, 是空調(diào)吹熱風(fēng), 或是 37 度溫箱放長(zhǎng)一點(diǎn)的時(shí)間, 我試過室溫過夜,酶切很好。

 3. 做 WESTERN BLOT 的時(shí)候,大家往往會(huì)摸索一抗、二抗的濃度,封閉時(shí)間,曝光時(shí)間 等等,而每次變換其中的一個(gè)條件就需要從新跑膠、轉(zhuǎn)膜,甚至重新提蛋白,這樣會(huì)浪費(fèi)大量的時(shí)間。其實(shí)*沒有必要這樣。一次轉(zhuǎn)膜后,將 PVDF 膜晾干,裁減成小塊,保存起 來,用的時(shí)候取出一塊,沒有任何影響。這對(duì)于摸索條件的戰(zhàn)友來說,節(jié)約了大量的時(shí)間。

4. 有關(guān)緩沖液和培養(yǎng)基配置  1)將緩沖液配方中的成分分別以 10-100 倍配成母液儲(chǔ)存,需要的時(shí)候只需將相應(yīng)的母液 混合,補(bǔ)加水稀釋即可  2)配培養(yǎng)基時(shí)通常會(huì)忘記各成分的量,如配 LB 時(shí)的三個(gè)成分不記得到底哪個(gè)是 5g,哪個(gè) 要 10 個(gè),因此可以在常用的試劑瓶的標(biāo)簽上注明所需的量,如配 LB 時(shí),在NaCl 瓶外注明 10g/L, yeast 5 g/L, tryton 10 g/L等,很方便,不需要每次配之前臨時(shí)翻書

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5. 有關(guān) PCR主反應(yīng)液配置:  在做克隆鑒定的時(shí)候經(jīng)常需要在酶切鑒定前進(jìn)行 PCR 鑒定,每次配置 PCR 反應(yīng)液很繁瑣, 可以將其配置類似 kit 的形式,按你需要的反應(yīng)體系列表,然后放大 100 倍配置 100×主反應(yīng) 液(100 次反應(yīng)),其中含 buffer,Mg2+,dNTPs,但不含引物和 Taq 酶,然后可以 10×分 裝或一管儲(chǔ)存在-20度,在需要的時(shí)候拿出融開,然后按所需的 PCR 反應(yīng)個(gè)數(shù)吸取相應(yīng)的 倍數(shù),再補(bǔ)加相應(yīng)反應(yīng)倍數(shù)的 Taq 和引物,混勻后分裝,這樣做的好處如下: 1)可的節(jié)省寶貴的時(shí)間,可早點(diǎn)收工,看球 2)避免每次反應(yīng)加樣不均的可能 3)大大減少 PCR 假陽性的產(chǎn)生

6. 有關(guān)酶切反應(yīng)液的配置:  在做酶切時(shí),也可以象 PCR 一樣配置主反應(yīng)液,每次反應(yīng)前先列好反應(yīng)的體系,算好需要 的反應(yīng)數(shù),然后按所需反應(yīng)的體系按所需反應(yīng)數(shù)放大,加入 buffer、酶、水,質(zhì)粒欄空缺, 然后混合后按除質(zhì)粒 DNA 的體積分裝,然后再在每管中加入相應(yīng)體積的質(zhì)粒 DNA 酶切, 這樣做的好處如下,特別是當(dāng)同時(shí)有 10幾個(gè)陽性克隆需要鑒定時(shí)尤為明顯。

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