南京信帆生物專業(yè)提供免疫組化代測(cè)服務(wù)，有專業(yè)的生物科研實(shí)驗(yàn)室，采用原裝試劑，結(jié)果準(zhǔn)確，速度快，歡迎廣大老師和學(xué)生前來(lái)咨詢！
材料 二甲苯，酒精（100％，95％），EDTA抗原修復(fù)工作液（pH8.0，稀釋50倍使用），0.5M Tris-NaCl (TBS) pH7.4（稀釋10倍使用）, DAB顯色液（臨用前配制：試劑盒A、B、C各50ul，于1ml水中混勻）。
方法
1. 石蠟切片置60℃烘箱中烘烤過(guò)夜
2. 二甲苯中脫蠟，梯度酒精入水(無(wú)水乙醇，95％酒精)，浸泡于蒸餾水中待用
3. 抗原修復(fù) 取500mlEDTA抗原修復(fù)工作液于1000ml燒杯中，在小功率電爐上加熱，至似沸微沸（為了防止脫片）。將組織切片緩慢放入燒杯。繼續(xù)加熱，保持液體在微沸狀態(tài)20分鐘。將燒杯移開(kāi)火源，室溫下自然冷卻后取出切片，蒸餾水洗1次3分鐘，TBS洗2次每次3分鐘。
4. 每張切片加一滴或50ul 3％過(guò)氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。 TBS沖洗3次，每次3min。
5. 除去TBS液，加一滴或50ul 一抗（滅活PLB免疫小鼠所得到的多抗，1：3000稀釋），陰性對(duì)照采用普通血清，室溫下孵育2小時(shí)，或4℃過(guò)夜。
6. TBS洗3次，每次5min，除去TBS液，每張切片加一滴或50ul polymer enhancer（試劑A），室溫下孵育20min，TBS沖洗3次，每次3min。
7. 除去TBS液，每張切片加一滴或50ul 過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗鼠/兔聚合物（試劑B），室溫下孵育30min，TBS洗3次，每次3min。
8. 除去TBS液，每張切片加一滴或50ul 新鮮配制的DAB，顯色3－10min。
9. 自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染10min，水沖洗。0.1%的鹽酸分化，自來(lái)水沖洗，TBS返藍(lán)。 10. 不需脫水，直接用中性樹(shù)脂封片。
注意事項(xiàng) 1.抗原修復(fù)時(shí)必須保證切片始終能浸泡在液體內(nèi)，一定要等工作液冷卻后才能將切片取出
在線咨詢