嘌呤霉素鹽酸鹽用作蛋白質(zhì)合成的抑制劑
嘌呤霉素對(duì)原核和真核生物的翻譯過(guò)程均有干擾作用。嘌呤霉素產(chǎn)生菌Streptomyces alboniger內(nèi)發(fā)現(xiàn)的pac基因編碼嘌呤霉素N-乙酰轉(zhuǎn)移酶(PAC)，賦予機(jī)體對(duì)嘌呤霉素產(chǎn)生抗性。這一特性如今普遍應(yīng)用于篩選特定攜帶pac基因質(zhì)粒的哺乳動(dòng)物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株。用作蛋白質(zhì)合成的抑制劑。抑制細(xì)菌、藻類(lèi)原生物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)。
用途及描述：科研試劑，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)，藥理學(xué)等科研方面。嘌呤霉素(puromycin;PM ) 是一種蛋白質(zhì)合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類(lèi)似的結(jié)構(gòu), 能夠同氨基酸結(jié)合，代替氨酰化的tRNA同核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合，并摻入到生長(zhǎng)的肽鏈中。雖然嘌呤霉素能夠同A位點(diǎn)結(jié)合,但是不能參與隨后的任何反應(yīng), 因而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。由于嘌呤霉素對(duì)原核和真核生物的翻譯過(guò)程均有干擾作用，故難于用做抗菌藥物，主要用作研究蛋白質(zhì)合成的生物化學(xué)工具。有人試用于腫瘤治療。
細(xì)胞篩選步驟
1. 在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中進(jìn)行細(xì)胞篩選前，應(yīng)先進(jìn)行濃度梯度實(shí)驗(yàn)確定適合該類(lèi)細(xì)胞的最佳藥物濃度即殺死所有宿主細(xì)胞的低濃度(一般哺乳動(dòng)物細(xì)胞選用的有效濃度范圍為1-15 μg/mL)。
2. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染48h后,換上加入了適宜濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基，然后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3. 每隔3-4天換液，更換的培養(yǎng)基為含相同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基。
4. 篩選7天后，評(píng)估剩余存活細(xì)胞是否全部為轉(zhuǎn)染成功克隆。另外，這些克隆的篩選時(shí)間主要依賴(lài)于宿主細(xì)胞系種類(lèi)和轉(zhuǎn)染篩選效率。
5. 篩選出的轉(zhuǎn)染成功克隆用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)7天，再進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。注意:需加抗生素篩選的細(xì)胞，應(yīng)為生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞。另外，如果細(xì)胞密度過(guò)大將會(huì)影響篩選效率，因此，接種細(xì)胞的匯合度應(yīng)不超過(guò)25%。
儲(chǔ)存條件：-20° C，避光防潮密閉干燥。
運(yùn)輸條件：2~8℃運(yùn)輸
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